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一次移液操作一般有哪些步骤

2018-10-30

步:装吸头。移液器套柄用力下压并小幅度旋转即可
 
第二步:量程设定
1、移液器量程的设定原则:由大到小!
1)由大量程向小量程调节时:如从600μl调节至400μl,直接调节;
2)由小量程向大量程调节时:先朝所需量程方向连贯旋转,旋转到达超过所需量程1/3圈处,回调到所需量程处。如从20μl调节至50μl,先调节至60μl,再回旋至50μl。
   注:这是因为由小量程向大量程调节时,弹簧的弹性形变在短时间内无法完全回复,需有一个恢复阶段,可以想象一下刚从沙发上起身时,沙发垫恢复原状也是需要一定时间的。
*正确的量程设定可以提高0.5%的移液准确性!
 
2、量程范围的选择
选择量程时,需要注意,一般在 10%-100% 量程范围内可以操作,但在 10% 量程操作需要较高的操作技巧。因此建议的佳量程是35%-100% 量程范围。在此量程范围,对操作技巧依赖更少,并保证移液的准确性和精度。从表中可以看出,当选择的量程范围越小,移液的准确性和重复性就会越差。
*选择合适的吸头量程,可提高1%移液准确性!
 
第三步:润洗吸头
用同一样品对吸头进行润洗。先吸取样品,然后排回样品池或废液槽。充分吸液排液2-3次。
润洗的作用:
1.在吸头内形成同质膜,降低吸头对样品的吸附;
2.有助于提高吸头多次相同移液操作的一致性。
注意:对于高温/低温样品,由于热胀冷缩带来更大的误差,不建议润洗。
*润洗吸头可提高0.5%的移液准确性!
 
第四步:吸液
此步影响移液准确性的因素主要有以下4点:
1、吸头浸入角度:建议尽量保持垂直,倾斜角度不大于15°。
*正确的移液角度,可提高2.5%移液准确性!
2、吸头的浸入深度:10μl以下的吸头,浸入深度为1-2mm;10-200μl的吸头,浸入深度为2-3mm;200-2000μl的吸头,浸入深度为3-6mm;2000μl以上的吸头,浸入深度为6-10mm。
*以正确吸头浸入深度进行吸液操作可提高1%的移液准确性(微量程移液器可达5%)!
3、吸头浸入时间:吸液后保持吸头浸入液面少1秒,然后将吸头平缓移开液面。对吸取大容量样品或者高粘度样品尤为重要。
4、吸液速度:吸液通常采用一档吸液、二挡排液,在吸液时保持平顺,缓慢松开活塞,控制好吸液速度。过快的吸液速度,会导致形成气柱,使移液不准确;样品液进入套柄,对活塞和密封圈造成损伤;带入气雾,造成样品交叉污染。
*不正确的吸液速度会导致至少5%的准确性下降!
 
第五步:排液和吹液
先将排液按钮按至档(排液档),略作停顿以后,再按至第二档(吹液档)。
常规排液操作:
1.沿内壁排液(常规)
2.直接排入液面下:直接排入液面排液时要保持活塞下压再离开液面,否则容易导致倒吸!
3.在液面上方排液
*正确的排液技术提高1%的移液准确性!

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